1 - Culture des microorganismes au laboratoire

• En microbiologie clinique

On cherche à obtenir des cultures pures afin de procéder à l'identification d'un micororganisme responsable d'une affection particulière

• En microbiologie industrielle

On cherche à produire le plus rapidement possible à partir d'éléments nutritifs disponibles en grande quantité et peu coûteux, une culture microbienne dont on peut facilement extraire, isoler puis purifier le produit désiré.

Les milieux de culture doivent satisfaire à toutes les exigences citées

Les différents milieux de culture

• Les milieux de culture synthétiques : sont définis chimiquement. On les utilise pour le dosage de certains composés ou pour une étude expérimentale du pouvoir mutagène.
• Les milieux de culture complexes : ne sont pas chimiquement déterminés. Ils comprennent tous les éléments nutritifs de base pour permettre la croissance des bactéries des bactéries chimioorganotrophes

Milieu de culture de base

Il se présente sous forme liquide ou solide (bouillon ou gélose). La gélose est un bouillon auquel on a rajouté de l'agar. Sur les milieux de culture solide, les bactéries forment des colonies.

Constitution

• Solution aqueuse d'extrait de boeuf ou de soja ou de peptones
• Infusions de boeuf et soja : sources de glucides, composés azotés, sels minéraux et vitamines hydrosolubles.
• Les peptones : proviennent de l'hydrolyse de protéines animales et sont une source d'azote
• Ces milieux se présentent sous forme liquide ou solide

On peut rajouter à ces milieux de base des substances particulières pour permettre la croissance de bactéries difficiles ou bien qui permettent l'identification d'une espèce donnée.

Ces milieux sont trouvés sur le marché, en poudre, tout prêts.

Selon leur uilisation au laboratoire, on distingue

• les milieux enrichis
• les milieux d'enrichissement
• les milieux sélectifs
• les milieux différentiels
• les milieux de propagation
• les milieux de transport

Les milieux enrichis sont des milieux nutritifs auxquels on rajoute des produits facilitant la culture

• le sang : frais
• le sang chauffé : gélose chocolatée
• le sérum
• les extraits de levure

Les milieux d'enrichissement : sont des milieux liquides permettant le développement d'espèces, et en en tuant d'autres, permettent la croissance rapide d'espèces pathogènes

Les milieux sélectifs : inhibent le développement de certaines espèces. L'inhibiteur peut être un sel, un colorant ou un composé chimique particulier. exemple la gélose au mannitol et au sel permet au staphylocoque de se développer et aux autres d'être inhibés.

Les milieux différentiels : permettent de distinguer les espèces appartenant à une même famille et présentant des caractéristiques communes.

Les milieux de propagation : permettent le développement d'une espèce pathogène, pour avoir une culture abondante : souvent une gélose au sang

Les milieux de transport : permettent d'ensemencer un prélèvement au chevet du malade, avant d'être repiqué au laboratoire. Les bactéries fragiles sont ainsi épargnées et pourront être identifiées.

2 - Techniques d'obtention d'une culture pure

Culture pure correspond au développement d'une seule espèce bactérienne dans un milieu donné.

Tous les microorganismes présentent les mêmes caractéristiques mais.....il peut y avoir des exceptions. C'est en milieu solide que les cultures pures sont le plus facilement identifiables par leur apparence.

Pour une espèce et un milieu donné, sur une même boîte, toutes les colonies sont identiques.

Chaque espèce possède une morphologie propre reconnaissable à l'aide de critères définis

Comment obtenir une culture pure ? .......techniques d'asepsie avant tout

Prévenir toute contamination Les milieux de culture neufs sont stériles,il faut éviter de les contaminer par les bactéries présentes dans l'air, sur les mains, à la surface des objet... Il faut travailler en zone stérile, près de la flamme ou un bec d'Hoffman Tout le matériel utilisé doit être stérilisé

......les techniques utilisées

• méthode par dilution : essentiellement utilisée en microbiologie alimentaire
• l'isolement par épuisement (voir TP)